|
 |
|
Poštovani, možete li mi pojasniti sljedeće: Kod adsorpcijske kromatografije savladavaju se sile koje stabiliziraju kompleks protein-stacionarna faza uporabom gradijenta rastuće koncentracije soli, pri čemu se proteini postupno otpuštaju silaznim redoslijedom njihova afiniteta prema stacionarnoj fazi.
Znači li to da će prvi izaći oni proteini čiji je afinitet za supstrat najveći? Kako gradijent rastuće koncentracije soli djeluje na njihovo otpuštanje?
Hvala Vam unaprijed, od velike ste pomoći :)
|
|
Ime i prezime:
Valentina V.
valentina.vucemilovic@gmail.com
|
 |
 |
Ono što piše znači baš to što si napisala tj. ako proteini izlaze silaznim slijedom afinitetâ, onda će prvi izaći oni s najvećim. Međutim, to nema smisla jer je stvarnost redovito suprotna: iz kromatografske kolone uvijek prvo izlaze frakcije koje se najslabije drže za stacionarnu fazu. Gradijenti pak služe tomu da se razlike u afinitetima mogu postupno povećavati odnosno da se postupno od stacionarne faze odvajaju sve jače vezane komponente smjese koja se analizira.
Kako će rastući gradijent soli djelovati na otpuštanje proteinâ sa stacionarne faze ovisi o tomu kakvi su proteini i kakva je stacionarna faza tj. o polarnosti njihovih površina. Da je sve to jednoliko, ne bi postojali i isoljavanje i usoljavanje, dijametralno suprotne posljedice dodatka solî u smjese vode i proteinâ.
Pretpostavljam da tvoj izvor nastupa s praktičnog gledišta, što će reći nekoliko srodnih vrsta kromatografskih kolona, vjerojatno s polarnim površinama, i jedne grupe proteinâ, vjerojatno hidrofilnih, kad će ih povećana ionska jakost moći maknuti s površine za koju se drže. No, i tada će se prvo eluirati najslabije vezani proteini, a onda postupno oni sa sve većim afinitetima prema stacionarnoj fazi.
Sve u svemu, zbunjuje me to sa silaznim redoslijedom afinitetâ. Ako uzmogneš, zanimalo bi me vidjeti detaljniji opis toga, da budem siguran radi li se o grešci, ili pak ja ili autori tvojih nastavnih materijala samo mislimo da znamo kako radi kromatografija.
Pozdrav, |
|
|
Odgovorio:
Ivica Cvrtila
i.cvrtila@rug.nl
<-- Povratak
|
|
|
Postavite
pitanje iz bilo kojeg područja kemije i
e-škola će osigurati da dobijete odgovor od kompetentnog znanstvenika. |
  |
|
